Nat Biotech綜述 | 基因編輯在免疫細(xì)胞治療中的應(yīng)用

NatBiotech綜述|基因編輯在免疫細(xì)胞治療中的應(yīng)用原創(chuàng)：?章臺柳?BioArt?昨天撰文|章臺柳責(zé)編|兮?基因編輯的免疫細(xì)胞已經(jīng)作為“活體藥物”用于血液腫瘤的治療?；蚓庉嫾?xì)胞的首個成功案例就是利用病毒載體插入CAR（chimericantigenreceptor），使自體T細(xì)胞獲得靶向腫瘤抗原的特異性。CAR-T細(xì)胞成功的臨床案例證明在體外進(jìn)行基因修飾是安全可實(shí)現(xiàn)的，且具有顯著的持久的抗腫

斑馬魚基因敲降思路

基因敲降項(xiàng)目的一般工作思路：1）首先分析目標(biāo)基因在斑馬魚胚胎發(fā)育早期是否有表達(dá)（如果沒有表達(dá)，則根本不存在敲降問題）。2）設(shè)計并安排實(shí)驗(yàn)（RT-PCR）檢測目標(biāo)基因在胚胎發(fā)育早期的表達(dá)情況（目的在于確認(rèn)目標(biāo)基因在胚胎發(fā)育早期有表達(dá)，同時在有表達(dá)的情況下建立檢測目標(biāo)基因表達(dá)下調(diào)的檢測方法）。實(shí)際上，即使數(shù)據(jù)庫中有描述該基因在胚胎發(fā)育早期有表達(dá)，也要開展此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。3）在確認(rèn)該基因在胚胎發(fā)育早期有表達(dá)的

斑馬魚敲降CRISPRi法與MO（嗎啡啉）法比較

一、基因敲降的前期準(zhǔn)備工作相同1.1?生物信息學(xué)分析目標(biāo)基因在斑馬魚早期胚胎發(fā)送過程中是否有表達(dá)。1.2?收集斑馬魚早期發(fā)育胚胎（通常為48?hpf?前的胚胎），提取總RNA，然后進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄（RT）。1.3?設(shè)計檢測目標(biāo)基因表達(dá)的PCR?引物，以1.2獲得的cDNA?為模板，進(jìn)行PCR?擴(kuò)增，確認(rèn)目標(biāo)基因在早期有表達(dá)。二、MO法與CRISPRi法的敲降原理不同2.1?MO?是在轉(zhuǎn)錄后水平上敲降基